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锥虫蓝染色的小鼠胚泡着床点的观察
发布时间:2021-01-13 09:09:11 浏览: 124次 来源:【jake推荐】 作者:-=Jake=-

中国实验动物学杂志990202中国实验动物学杂志1999 ol.9 No.2 1999台盼蓝染色观察小鼠胚囊的植入点摘要本实验探索了使用硫氨酸和台盼蓝染料来研究在怀孕4到5天对小鼠进行染色,以显示胚泡着床部位的可能性。研究结果:1.锥虫蓝可作为胚泡着床点的染色反应,具体方法为:尾静脉注射0.5%锥虫蓝0.3ml,观察10min,并加入亚硫氨酸无效;2.两侧子宫角的植入点数量分布存在显着差异,左右子宫角的6.40 1. 64和4.802. 40差异很大;3.植入点之间的距离为2.25 0.87m关键词蛋氨酸锥虫蓝胚泡着床研究StainingEm bryo Im植入位点TrypanBlue Tan Yi等人,科学亚洲体育平台 ,胚胎植入部位ith锥虫蓝结果表明0.5%锥虫蓝未注射静脉注射十次后即可清楚地观察到隐匿的植入位点。其次,子宫角的数量差异显着。右角分别显示6.40 1. 64,4.802. 40.位置,其次,在染色两侧的任何两个染色位点之间的平均距离为锥虫蓝。锥虫在锥虫蓝锥虫卵中的生长植入是胎生哺乳动物生殖生理的重要组成部分,是母体与胚泡相互作用的同步过程。在化学发育过程中,输卵管或子宫腔中游离的胚泡侵入子宫内膜,然后形成胎盘以从母亲那里获得足够的营养。

对植入机制的研究不仅对人类计划生育和不育症的治疗具有重要的指导意义,而且对稀有野生动物的人工繁殖也具有重要的指导意义。观察染色的胚泡比肉眼观察胚胎结节更好。外观应该提前3到4天,并且更清晰,更准确。因此,研究植入过程中植入部位的局部生理变化以及激素,细胞因子,细胞外基质成分,相关的蛋白酶和抑制剂等活性分子的变化对硫酸盐的调节作用具有实用价值。芬兰人(Finn)于1967年首先成功用Pontamineblue对胚泡进行了染色,后来雷德蒙德(Redmond)推荐了Evan'sblue。由于上述两种染料不易获得,笔者使用两种常用的染料硫蛋白和锥虫蓝进行了胚泡着床点的染色试验。两种染料都是常见的活性染料。蛋氨酸主要用于染色核材料,锥虫蓝主要用于识别死亡和活细胞或胚胎。没有文献报道它们的囊胚着床点染色。结果报告如下。 file:/// F | / qikan_htm Extract_2000before / kjqk(200810)/ zgsydw xzz / zgsy99 / zgsy9902 / 990202. htm 1/4页)2010-1-1 16:41:04中国实验动物杂志科学990202材料与方法1实验动物由我们中心提供的重达18-22g的一级NIH小鼠。

2试剂硫氨酸和锥虫蓝是由我们学校的胚胎形成系送出的。用无菌盐水将硫氨酸配制为三种浓度:0.5%1. 0%和2.0%;锥虫蓝配制为两种浓度:1. 0%和0.5%。 3方法对雌性小鼠进行超排卵治疗。腹膜内注射SG SG,每天早晨10IU /只; 48h后小鼠兵兵,每只小鼠注射5〜10IU的hC,然后将雄性和雌性小鼠在21℃笼养过夜。(D)处死,取出子宫,在白色背景下自然地将其扁平化。观察,计数和测量子宫中的染色带。用肉眼观察计数,并在带有两尺圆规和普通标尺的解剖镜下进行测量。然后用生理盐水冲洗子宫腔,并在倒置显微镜下观察囊胚的存在。此时,胚泡已经从透明带中脱离,并且可以看到少量的内部细胞团和胚泡腔。从1998年6月至10月,实验组共观察到62只妊娠小鼠,其中硫氨酸组17只,锥虫蓝组45只。结果1个硫氨酸试验组(见表1))注射3种浓度的硫氨酸染料溶液后,有17只小鼠的肤色没有变化。解剖后,器官颜色正常,在子宫内未发现染色斑或色带。表1硫氨酸染色效果观察值观察到有15个早期胚胎从子宫中冲出,占总数的88.2%,表明不能植入硫氨酸。着床点数染色病例数冲洗出子宫的胚胎数0.5%0.3m 1. 0%0.3m2. 0%0.3m 2锥虫蓝试验组(请参阅表2)。

表2观察到的锥虫蓝染色浓度的影响。注射盒总数植入点染色盒数量1. 0%0.3m蓝色太暗,无法观察到0.5%0.3m文件:/// F | / qikan_htmExtraction_2000before / kjqk(200810)/ zgsydw xzz / zgsy99 / zgsy9902 / 990202. htm 2/4页)2010-1-1 16:41:04中国实验动物学杂志990202 1.注射后10秒浓度为0%的小鼠组锥虫蓝的眼睑(包括眼球),嘴唇,脚趾垫和外阴逐渐从肉红色变成浅蓝色到蓝色。 10分钟后,小鼠反应正常,尿液呈蓝色。解剖后,肠壁,膀胱,系膜和子宫全是深蓝色,肝脏和脾脏是深绿色。子宫中的细节无法区分。0.浓度为5%的10只小鼠中有8只为阳性,染色较浅。肉眼可见子宫内染色带(见图)。染色带是圆形的并且平行排列。 10分钟后,染色已扩展到70- 1. gif(5944字节)。附着的图像在植入点染色,左子宫角有4条带,右子宫角有3条带,台盼蓝染色3条。观察到30只小鼠的囊胚植入点。染色阳性22例og真人厅 ,阴性8例。阳性条带染色均匀,条带之间的染色深度略有不同。

计算阳性病例数,结果是左右子宫角中分别有6.40 1. 64和4.802. 40个植入点,P = 0.0417,小于0.05。两者之间存在显着差异。对于8只阴性小鼠,用生理盐水冲洗子宫腔后,没有卵或胚胎。在一些小鼠中亚洲体育平台 ,有未受精的寡头或发育不良的桑ula。阶段胚胎。 4测量了植入点之间的距离。 106个植入点之间的距离为1. 0〜6.0m,平均值为2.25 0.87m,其中10例占9.的4%。 k4] 0m在讨论胚泡植入时,子宫内膜上皮细胞和间充质细胞会发生一系列适应性变化,尤其是间充质细胞的蜕膜化为胚泡植入提供了一个兼容的内部环境。当胚泡被定位并粘附于子宫内膜时,它会刺激子宫内膜局部产生高浓度的前列腺素。前列腺素可增加子宫内膜血管的通透性,从而可以放松肌肉并放松毛细血管。毛细血管渗透性的增加有利于营养物质通过管壁,从而使胚泡的内壁变得疏松和浮肿,从而有利于植入。现在认为当胚泡被定位时,大分子染料穿过毛细血管并聚集在植入部位。硫氨酸是一种碱性核染色剂,通常用于染色质,粘蛋白,骨片等的染色。台盼蓝可以穿透质膜受损的细胞,而正常细胞可以被清除。埃文斯蓝一般用于原生动物活体或细菌荚膜的染色。硫氨酸和锥虫蓝染料毒性低,可以在体内用作染料,外观为深蓝色。该实验证明锥虫蓝可以使植入点染色,而硫氨酸则不能。原因尚不清楚。

实验结果表明,锥虫蓝可以通过向尾静脉注射0.5%和0.3m蓝色染料来染色胚胎植入点,并在10分钟后观察。帕里亚等。沾上了埃文的蓝色。对于1. 0%,0.1m l,5m文件:/// F | / qikan_htm extract_2000before / kjqk(200810)/ zgsydw xzz / zgsy99 / zgsy9902 / 990202. htm 3/4页)2010 -1-1 16:41:04中国实验动物学杂志990202。在硫氨酸浓度分别为1. 0%和2.0%的测试组中极速百家乐 ,从子宫中冲洗掉的胚胎数量少于相应的数量。案件总数。同样,在台盼蓝试验组中有染色阴性的小鼠,证实阴性组的子宫中没有洗净透明带或胚样细胞团,还有一些未受精卵囊的前期胚胎。或观察到发育不良的桑ula。这表明所有妊娠阳性的小鼠都可以使用锥虫蓝染色来显示其胚胎植入点。在实验中,小鼠有假孕。原因是天气太热,精子活力下降,卵巢没有排卵或卵细胞的受精能力下降。在正常生理条件下,左右卵巢受到相同的内部和外部刺激,它们的发育和排卵机会应相同。对于具有双角子宫的哺乳动物,子宫角各侧的可接受性应保持一致。但是,实验3的结果表明,左右子宫角的植入点数量存在显着差异。左子宫角大于右子宫角。确切原因尚不清楚。这可能与观测数量不足有关。然而,在转基因小鼠的胚胎移植过程中,有些学者强调应选择功能良好的子宫角进行移植,提示左右子宫角的功能可能不同。

对于植入点之间的距离,由于子宫长度的个体差异,尤其是植入点的数量,因此该距离不一致。通常,如果植入点很少,分布稀疏,并且距离大多为2.0〜3.5m,则有足够的空间用于随后的胎盘形成和car体发育。近年来,植入点染色已被广泛使用,尤其是在植入和抗植入的实验研究中。它具有直观,高效和准确的优势。例如,用于证实转移因子TGF-α与大鼠胚泡的植入有关。 [10]研究oxa-10基因突变小鼠的生育力降低的机制[11]等。在本实验中吉林快三 ,用锥虫蓝染色囊胚着床点的方法简便易行,稳定可靠,值得同行参考。该实验在医学超声工程研究所完成。作者:谭一谷梅丽(重庆医科大学附属第二医院妇产科)魏珂(重庆医科大学实验动物中心);王志标(医学超声工程研究所)参考文献1刘斌主编。人类胚胎学。人民卫生出版社小鼠兵兵,199677 2Finn等。生殖,1967年,13259 3 Redmd和LifeSci。 1994,55(23)1863 4 Psychoyos ericanPhysiological Society 1973,1875Jacobs等。Endocrinol 1993,132300 ougeRC等。Biol。Reprod。,1998,58875 7龚志进,等。病理组织的制备和染色技术。上海科学技术技术出版社,1994,398,杨汉民主编,细胞生物学实验,高等教育出版社,1997,122 9魏红主编,医学实验动物学,四川科学技术出版社,1997,441 10Tam ada LifeSci。 1997,60(7)1515 11Benson开发,1996,122(9)2687 file:/// F | / qikan_htm Extract_2000before / kjqk(200810)/ zgsydw xzz / zgsy99 / zgsy9902 / 990202. htm 4 / 4页)2010-1-1 16:41:04

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